准备：首先将内层灭菌桶取出，在向外层锅内加入适量的水，使水面与三角搁架相平为宜。一般来说，每次灭菌前都应加水。

放回灭菌内桶，并装入待灭菌物品：将准备灭菌的培养基及空玻璃器皿用牛皮纸包好，装入锅内套层中。

加盖：先检查锅盖上的密封圈是否良好，并去除污物，再将锅盖上的排气软管插入内层灭菌桶的排气槽内，然后盖严锅盖，采用对角式均匀拧紧锅盖上的螺栓，使螺栓松紧一致，勿使漏气。也有些不是用螺栓，而是像家庭使用的高压锅一样，只要将锅盖与锅的槽口对准，顺时针转动，卡到位即可。

用电炉或煤气加热(大部分用电热管加热)，并同时打开排气阀，以便锅内水沸腾后排出锅内的冷空气。这里要特别注意，灭菌锅内冷空气的排除是否完全极为重要。因为空气的膨胀压力大于水蒸汽的膨胀压力，所以当水蒸汽中含有空气时，在同一压力下，含有空气蒸汽的温度低于饱和蒸汽的温度。通常应等锅内水烧开后排气3~5min，待冷空气完全排尽后，关上排气阀，让锅内的温度随蒸汽压力增加而逐渐上升。另一种排除冷空气的方法是：按上述方法盖紧锅盖，加热使锅内产生蒸汽。当压力表指针达到33.78kPa时，打开排气阀，将冷空气排出，此时压力表指针下降。当指针下降至零时，冷空气排尽，关上排气阀。当锅内压力上升到所需压力时，控制热源，维持压力至所需时间。

达到灭菌所需时间后，切断电源或关闭煤气。让灭菌锅内温度自然下降，当压力表的压力下降到0时，打开排气阀，旋松螺栓，打开锅盖，10min后取出灭菌物品。千万要注意，如果压力未降到0就打开排气阀，会因锅内压力突然下降，使容器内的液体由于内外压力不平衡而冲出烧瓶口或试管口，造成棉塞沾染培养基而发生污染  。

经常检查灭菌器电源线的接地是否良好，以保证人身安全。

灭菌器应置于通风干燥、无易燃易爆物品的室内使用。

安全阀、排气阀出厂时已校定位置，阀上的铅封及螺丝不得任意拆启。

对堆放物品不得超过总容积的4/5位置。

密封圈切勿附油，以免损坏胶质而造成漏气。

严禁对与蒸汽介质接触引起爆炸或突然升压性的化学物品灭菌。

堆放灭菌器物品时，严禁堵塞安全阀、排气阀的出气孔，必须留出空位确保空气畅通，否则安全阀和排气阀因出气孔堵塞不能工作，造成事故。

灭菌液体时，应将液体灌装在耐热玻璃瓶中，以不超过3/4体积为好，瓶口选用棉花纱塞。切勿使用打孔的橡胶或软木塞；在灭菌结束后，不准立即释放蒸汽，必须待压力表指针回零后方可排放余气。

对不同类型、不同灭菌要求的物品，如敷料和液体等，切勿放在一起灭菌，以免造成损失。

压力表使用日久后，压力指示不正确或不能回复零位，应及时予以更换，平时应定期送有资质的单位进行校验，若不正常，应换上新表。

安全阀应定期检查可靠性，如压力表指针已超过0.165Mpa时安全阀不起跳则必须立即停止使用并更换合格的安全阀。

消毒器使用时应消毒室内，有专人操作，不得在公共场所使用。

插座必须装有连接地线应确保电源插头插入牢固。切勿损坏电线或使用非指定的电源线。电源线连接上的弹簧片为保护接地，应保持接触良好。

安全阀和压力表使用期限满一年应送法定计量检测部门鉴定。

消毒器物品之间留有间隙，顺序地堆放在消毒器内的筛板上，这样有利于蒸汽的穿透，可提高灭菌效果。

加热时注意把电源线插头插紧，使插头接地铜片与护罩紧密接触，保证使用安全。加热开始时打开排气阀，消毒器内冷空气会随着加热由阀孔溢出。当阀孔有急的蒸汽冲出时，将排气阀关闭。消毒器压力达到所需范围时，适当调整或通断热源，使之维持恒压，并开始计算消毒时间，按不同的物品和包装保持所需消毒的时间。

敷料、器械和器皿等消毒后需要干燥时，可在消毒终了时将消毒器内的蒸汽由排气阀排出，当压力表指针回复到零位后稍待1-2分钟，将盖打开，并继续加热几分钟，这样能使物品达到干燥目的。

溶液培养基等若在消毒后立即放汽，会因压力突然下降引起瓶子爆破或消毒器内装溶液溢出等严重事故。所以在消毒终后不应立即放汽，而应停止加热使其自然冷却20-30分钟，使内在压力冷却而下降至零位（压力表指针回到零位）后数分钟，将排气阀打开，然后略微打开盖子（开一条缝），人离开消毒室，待其自然冷却到一定程度再取出。

灭菌器如停用一个月以上需重新使用时，检查灭菌器电源线的接地是否可靠。

经常检查密封圈密封性，并及时更换。

每天终止使用后清除容器内的水，清理容器及电热管上的水垢，能延长电热管的寿命与节能。